細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)服務(wù)

使用說明書

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

第1版（2016年04月修訂）

【服務(wù)內(nèi)容】

侵襲實(shí)驗(yàn)大部分是對腫瘤細(xì)胞侵襲能力的檢測，將待研究的細(xì)胞加入Transwell小室的上室，下室加入高濃度FBS培養(yǎng)液，下室的培養(yǎng)液影響上室的細(xì)胞，使細(xì)胞透過基質(zhì)膠和聚碳酸酯膜，記錄細(xì)胞的穿過膜的個(gè)數(shù)，實(shí)驗(yàn)過程中不同處理組的細(xì)胞透過膜的個(gè)數(shù)不同，其侵襲能力不同，本實(shí)驗(yàn)的目的是檢測細(xì)胞的侵襲能力的強(qiáng)弱。

【項(xiàng)目和周期】

周期：1~2周

基本步驟：

（1）預(yù)冷：槍頭、EP 管、培養(yǎng)板、Transwell小室4℃預(yù)冷半小時(shí)。

（2）包被基底膜：Matrigel膠4℃過夜融化成液態(tài)后與無血清 DMEM培養(yǎng)基按1：9比例稀釋，每孔 40ul 稀釋膠均勻涂布于 Transwell小室濾膜的上表面，37℃、5％CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育2小時(shí)。

（3）水化基底膜：每室加入50ul無血清的DMEM 培養(yǎng)基，于37℃、5％CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1小時(shí)，吸棄培養(yǎng)液。

（4）制備單細(xì)胞懸液：分別取轉(zhuǎn)染后培養(yǎng) 24 小時(shí)的細(xì)胞，0.25％胰酶消化并收集細(xì)胞，1000rpm 離心 5min，棄上清液，用無血清 DMEM 培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度為 1×10e6 個(gè)／ml。

（5）接種細(xì)胞：將單細(xì)胞重懸液各取 200ul 加入上室，下室中加入600ul含 30％FBS 的 DMEM 培養(yǎng)液，每組細(xì)胞設(shè)3個(gè)復(fù)孔。種板時(shí)注意下層培養(yǎng)基和小室中的聚碳酸酯膜間不要有氣泡產(chǎn)生，于37℃、5％CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72小時(shí)。

（6）固定、染色：取出小室，小心吸去上室的培養(yǎng)液，PBS緩沖液輕洗 3次，用消毒濕棉簽輕輕擦凈上室未侵襲細(xì)胞及 Martrigel膠，95%酒精固定30min，結(jié)晶紫染色 10min，自來水沖洗3次以上，晾干。

（7）拍照、計(jì)數(shù)：20 倍光學(xué)顯微鏡下觀察，計(jì)數(shù)每視野的侵襲細(xì)胞數(shù)，計(jì)算平均值。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)重復(fù)3次。

 

【客戶提供的材料】

 1.待檢測或處理的細(xì)胞；如果常見的人和大小鼠細(xì)胞系，公司可免費(fèi)提供。

 2.細(xì)胞處理的相關(guān)藥物和實(shí)驗(yàn)方案；

【反饋給客戶結(jié)果】

 1、提供相應(yīng)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和圖表；

 2、提供具體的實(shí)驗(yàn)報(bào)告；