小鼠抗體可變區(qū)基因擴(kuò)增試劑盒
使用說明書
僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!
第1版（2016年04月修訂）
[產(chǎn)品信息]
本試劑盒可以用于對雜交瘤、小鼠外周血單個核細(xì)胞、小鼠脾細(xì)胞及小鼠其他組織中抗體可變區(qū)基因的擴(kuò)增。相關(guān)標(biāo)本前期需經(jīng)過mRNA提取和用oligo dt 為引物反轉(zhuǎn)錄成cDNA。本試劑盒通過對擴(kuò)增體系中的組分進(jìn)行了優(yōu)化，即保證了擴(kuò)增的特異性，又?jǐn)U大了對所有抗體基因的兼容性?？捎糜谌我怆s交瘤中鼠源抗體基因的擴(kuò)增，小鼠免疫后全部抗體基因的擴(kuò)增和小鼠抗體文庫的構(gòu)建。
[試劑組分]
貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
IS088-1 | 小鼠抗體重鏈擴(kuò)增體系 | 100ul |
IS088-2 | 小鼠抗體輕鏈擴(kuò)增體系 | 100ul |
IS088-3 | Taq DNA聚合酶預(yù)混體系 | 500ul |
IS088-4 | 陽性對照 | 5ul |
[適用范圍]
小鼠抗體可變區(qū)基因擴(kuò)增
[儲存及有效期]
-20℃保存，有效期6個月。
[實(shí)驗(yàn)操作]
所有試劑融化后瞬時離心并放置于冰上，按下列組分配制反應(yīng)體系（以10ul為例）
1、擴(kuò)增抗體重鏈
名稱 | 體積ul |
小鼠抗體重鏈擴(kuò)增體系 | 1 |
Taq DNA聚合酶預(yù)混體系 | 5 |
cDNA | a（含2-100ng DNA，約0.2-1ul） |
H2O | 4-a |
備注：如需做陽性對照，將cDNA換成1ul陽性對照 (IS088-4) 即可。
2、擴(kuò)增抗體輕鏈
| 名稱 | 體積ul |
| 小鼠抗體重鏈擴(kuò)增體系 | 1 |
Taq DNA聚合酶預(yù)混體系 | 5 |
| cDNA | a（含2-100ng DNA，約0.2-1ul） |
| H2O | 4-a |
備注：如需做陽性對照，將cDNA換成1ul陽性對照 (IS088-4) 即可。
3、按下列條件擴(kuò)增
Temp | Time | Cycles |
94℃ | 3min | 1 |
94℃ | 30s | 30 |
55℃ | 30s | |
72℃ | 45s | |
72℃ | 5min | 1 |
4℃ | ∞ | 1 |
4、PCR產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖電泳后，取350bp左右的DNA條帶為模板進(jìn)行二次PCR大擴(kuò)回收，經(jīng)TA克隆后測序即可獲得抗體可變區(qū)基因。
[注意事項(xiàng)]
1、試劑避免反復(fù)凍融，否則會影響擴(kuò)增效率；
2、建議采用新鮮標(biāo)本的cDNA為模板；
3、反應(yīng)體系的配置在冰上完成。
