無血清293細胞培養(yǎng)基

使用說明書

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

第1版（2016年04月修訂）

[關(guān)聯(lián)信息]

無血清293細胞培養(yǎng)基適用于懸浮培養(yǎng)條件下的HEK293細胞（如293-F，293-T，Expi-293F等）的高密度生長和瞬時轉(zhuǎn)染表達。無血清293細胞培養(yǎng)基含有細胞生長所需的全部營養(yǎng)成份，無需添加任何添加物即可使用。無血清293細胞培養(yǎng)基的基本信息如下表所示：

外觀：	澄清透明紅色液體
滲透壓：	275±15 mOSM
pH：	6.9-7.4
無菌檢測：	無菌
內(nèi)毒素：	<5 EU/mL

[制品內(nèi)容]

編號	名稱	規(guī)格
IS91-1	無血清293細胞培養(yǎng)基	100ml
IS91-2	無血清293細胞培養(yǎng)基	2*500ml

[儲存及有效期]

2-8℃避光保存，有效期一年。

[使用方法]

以下步驟僅供參考

（一）細胞馴化

1）直接馴化

大部分情況下，培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基中的細胞，可以直接適應(yīng)無血清293細胞培養(yǎng)基，只要按照日常傳代方式（稀釋）更換培養(yǎng)基即可。

2）漸進式馴化

注意：選用低代次、處于對數(shù)生長期的細胞進行馴化

①在原培養(yǎng)基中復(fù)蘇細胞并繼續(xù)使用該培養(yǎng)基傳代2到3次至細胞生長穩(wěn)定，當(dāng)細胞密度達到2x10⁶ cells/ml后進行傳代，傳代細胞密度控制在0.5-0.6×10⁶ cells/mL，5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與無血清293細胞培養(yǎng)基的比例為75:25；

②將細胞置于37℃，5% CO2，轉(zhuǎn)速為110-175 rpm的恒溫搖床中進行培養(yǎng)；

③當(dāng)細胞密度3-4天后達到3x10⁶ cells/ml且細胞活率>90%，傳代時5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與無血清293細胞培養(yǎng)基的比例為50:50，細胞密度控制在0.5×10⁶ cells/mL。如細胞生長慢，可離心上清，留20%條件培養(yǎng)基，加入80%的5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與無血清293細胞培養(yǎng)基比例為75:25的混合培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)；

④重復(fù)步驟③逐步增加無血清293細胞培養(yǎng)基所占的比例（5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與無血清293細胞培養(yǎng)基的比例為25:75至10:90）直到100%的無血清293細胞培養(yǎng)基；

⑤經(jīng)過在100%的無血清293細胞培養(yǎng)基中的幾次傳代培養(yǎng)，傳代后3-4天細胞的密度可以達到2-3×10⁶ cells/mL，細胞存活率大于90%，這說明細胞已經(jīng)完全適應(yīng)了無血清293細胞培養(yǎng)基。之后進行細胞的傳代培養(yǎng)時，細胞的起始密度可以降到0.3×10⁶cells/mL，一般傳代2-3次后再進行轉(zhuǎn)染實驗。

注意: 一般細胞馴化過程中，前三代細胞的狀態(tài)可能不是很好，但一般從第四代開始狀態(tài)會有改善。

（二）細胞傳代

1）取細胞培養(yǎng)樣品，人工或儀器測定細胞密度以及活率；

2）計算傳代所需的細胞用量，建議起始細胞密度為0.2-0.4×10⁶ cells/mL。建議復(fù)蘇的細胞至少培養(yǎng)兩代后再用于其他用途。傳代培養(yǎng)體積建議15-20 mL（100 mL的培養(yǎng)瓶）或50-60 mL（250 mL 的培養(yǎng)瓶）；

3）將細胞置于37℃，5%CO2，轉(zhuǎn)速為110-175 rpm的恒溫搖床中進行培養(yǎng)，3-4天傳代一次。

細胞轉(zhuǎn)染在無血清293細胞培養(yǎng)基中，采用商業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑（例如ExpiFectamine? 293 Transfection Kit）或PEI可以實現(xiàn)對HEK293細胞的高效轉(zhuǎn)染。

[注意事項]

1、取液或者分裝需在超凈工作臺，防止污染物進入；

2、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作并嚴格按照實驗室安全操作手冊進行。